使用Lipofectamine™ 2000轉(zhuǎn)染Stealth™ RNA或者進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，遵從以下一般性指導(dǎo)：

1 為了獲得******基因阻斷結(jié)果，每一種細(xì)胞系轉(zhuǎn)染Stealth™RNA或者siRNA的量都需要經(jīng)過實(shí)驗(yàn)確定。如果您是首次轉(zhuǎn)染您的細(xì)胞系，推薦嘗試使用幾個(gè)Lipofectamine™2000的濃度，并在20-100nM范圍內(nèi)改變Stealth™RNA或者siRNA的濃度，以確定達(dá)到******基因阻斷水平所需要的條件。高濃度的Stealth™RNA或者siRNA可能具有細(xì)胞系依賴性。注：我們推薦開始時(shí)使用40nM Stealth™ RNA或者。

2 在30-50％細(xì)胞匯合度時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。通?；蜃钄嗟姆治鲋辽僖谵D(zhuǎn)染后24-72小時(shí)進(jìn)行。低密度轉(zhuǎn)染細(xì)胞可以使轉(zhuǎn)染和分析之間更長的間隙更長，從而使由于細(xì)胞過度生長造成的細(xì)胞活性損害減少到最低。根據(jù)靶基因的特性，高密度轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可能更加適合條件的優(yōu)化。

3 不要在轉(zhuǎn)染時(shí)的培養(yǎng)基中加入抗生素，因?yàn)檫@將會(huì)降低細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率和導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

4 為了獲得更好的結(jié)果，可以使用Opti-MEM® I 低血清培養(yǎng)基（目錄號(hào)31958-062）在形成復(fù)合物前稀釋Lipofectamine™2000和Stealth™ RNA或者寡聚物。

5 可以使用invitrogen BLOCK-iT™熒光寡聚物(BLOCK-iT™　Fluorescent Oligo)(目錄號(hào)　2013)幫助優(yōu)化細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染條件。一旦確定了用來轉(zhuǎn)染的******條件，在每一次實(shí)驗(yàn)都包括BLOCK-iT™熒光寡聚物，作為轉(zhuǎn)染效率的指示劑。如果需要的更多的信息，請參閱BLOCK-iT™熒光寡聚物說明書，說明書可以通過我們的網(wǎng)站下載或者通過撥打技術(shù)服務(wù)熱線。