細(xì)胞培養(yǎng)方法
1、收到細(xì)胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快聯(lián)系。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。因路途耽擱等因素,細(xì)胞會有部分脫落。先把細(xì)胞放入培養(yǎng)箱里靜止3小時左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,然后在超凈臺中將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基吸出一部分,保留大約5-6ml左右在培養(yǎng)瓶里。將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
3、24小時后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml胰酶消化,消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘??梢苑湃?span lang="EN-US">37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之完全脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。